高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度

摘要：

目的 建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法 血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论 该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.

关键词：高效液相色谱法(HPLC)、同型半胱氨酸(Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(CysGly)、半胱氨酸(Cys)、谷胱甘肽(GSH)

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分类号：O657.7+2(分析化学)

资助基金：上海市老年医学临床重点实验室建设项目13dz2260700 The work was supported by Shanghai Key Laboratory of Clinical Geriatric Medicine Project 13dz2260700

在线出版日期：2014-11-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：679-684