小鼠骨桥蛋白(OPN)基因RNA干扰慢病毒载体的构建及体内抑制效果鉴定

摘要：

目的 构建骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因RNA干扰慢病毒载体并在小鼠体内鉴定其抑制效果.方法 参照OPN GenBank上的序列,对OPN基因沉默位点进行分析,设计针对OPN信使RNA的小发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA) OPN-shRNA及阴性对照(negative control-shRNA,NC-shRNA)序列,合成pSicoR-GFP-shRNA 重组体.经鉴定序列无误后,与pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91辅助质粒包装并转染293FT细胞,得到有效滴度为5×109 TU/mL的病毒原液.经尾静脉将构建的慢病毒载体注射入小鼠体内,qRT-PCR及Westem blot检测小鼠肝脏OPN mRNA及蛋白的抑制效果.结果 成功构建针对OPN的shRNA慢病毒载体,经纯化、浓缩得到滴度为5×109TU/mL病毒原液.与正常对照组、阴性对照组相比,实验组OPN mRNA及蛋白表达水平明显下降;正常对照组、实验组OPN mRNA及蛋白表达水平无明显差别.结论 利用RNA干扰技术,借助慢病毒载体,成功构建小鼠肝脏OPN基因低表达模型.为进一步研究OPN在胆石症等疾病中的作用提供了有力工具.

关键词：骨桥蛋白(OPN)、小发夹RNA(shRNA)、慢病毒载体、小鼠

所属期刊栏目：39

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目30801105

在线出版日期：2012-11-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：496-501