NK4蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化、复性及活性测定

摘要：

目的 在大肠埃希菌(E. coli)中高表达NK4蛋白,经鉴定、纯化、复性后测定其生物学活性.方法 采用重组DNA技术对已有质粒pGEX-4T-1-NK4和pBV220-HGFα进行改造,构建质粒pBV220-NK4,并使其转化E. coli BL21(DE3),温控诱导表达目的 蛋白NK4.蛋白鉴定采用SDS-PAGE和Western blot;蛋白纯化采用包涵体超声破碎、洗涤和Sephacryl-S200凝胶过滤层析.经梯度稀释复性后,采用MTT法和免疫细胞化学方法 检测重组蛋白NK4对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)ECV304增殖的作用.结果 重组质粒pBV220-NK4酶切图谱和序列测定与预期一致.SDS-PAGE显示有相对分子质量49 000的目的 蛋白,表达量为30%.Western blot结果 证实目的 蛋白带有NK4的氨基端,经包涵体洗涤、层析后NK4的纯度为95%.复性后的NK4可抑制ECV304增殖,并抑制ECV304增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.结论 我们建立了NK4的原核高表达体系及纯化制备工艺,所制备的NK4蛋白具有生物学活性,为大规模制备有活性的NK4及深入研究其相关功能奠定了基础.

关键词：NK4、原核表达、纯化、活性测定

所属期刊栏目：38

分类号：R378.2+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：山西省科技攻关项目20080311059-6;山西医科大学科技创新项目01200713

在线出版日期：2011-04-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：60-65