生物素标记法分析MCF-10A细胞质膜蛋白质

摘要：

目的 优化细胞膜蛋白分离纯化技术,以期实现快速、高效分析细胞膜蛋白质.方法 本文以乳腺细胞系MCF-10A为模型,用sulfo-NHS-LC-biotin标记完整的活细胞,使细胞表面蛋白生物素化,细胞裂解后利用链亲和素对膜蛋白进行分离富集,再洗脱膜蛋白,达到分离纯化的目的 .利用液相层析偶合串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)鉴定提取得到MCF-10A膜蛋白.结果 sulfo-NHS-LC-biotin浓度为0.2 mg/mL时得到的标记纯化膜蛋白最多,可作为标记最适浓度.利用这种方法鉴定出256个蛋白质,生物信息学分析表明其中膜蛋白占63%,比传统膜蛋白分离纯化方法得到的结果好.结论 这种方法省去常规分离膜蛋白时所需的超速离心,具有操作简单、可行性高、平行性高的特点,有望用于规模化肿瘤膜蛋白的差异比较,为肿瘤早期诊断及治疗提供新的靶标.

关键词：蛋白质组、生物素化、亲和纯化

所属期刊栏目：37

分类号：R446.61(诊断学)

资助基金：上海市教育委员会曙光计划05SG05;上海市科学技术委员会重大项目07dz19505;国家自然科学基金委员会项目30970653;国家重点科研项目2008ZX10002-017、2009ZX09301-011

在线出版日期：2011-03-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：710-714