甲基CpG结合域四聚体蛋白的原核表达、纯化及鉴定

摘要：

目的 在大肠埃希菌中表达甲基CpG结合域四聚体蛋白,并对其进行纯化和鉴定.方法 将重组表达质粒4×MBD-pET30b+转化大肠埃希菌DH5a克隆扩增并测序鉴定后.转化大肠埃希菌BL21(DE3)后接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白的表达.表达产物经Ni-NTA亲和层析纯化,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白表达,用此蛋白免疫染色人胚肾细胞后用荧光显微镜观察.结果 克隆质粒测序结果与理论预期完全一致,SDS-PAGE显示在大肠埃希菌中表达出相对分子量为46 000的目标蛋白,Western blot显示目标蛋白带有His融合标签(氨基端)和HA标签(羧基端).荧光显微镜观察显示MBD蛋白能与细胞内的甲基化CpG基序特异性结合.结论 成功表达并纯化了具有免疫原性的甲基CpG结合域四聚体蛋白,为今后进一步研究DNA甲基化奠定了基础.

关键词：甲基CpG结合域、原核表达、蛋白纯化、DNA甲基化

所属期刊栏目：36

分类号：Q51(蛋白质)

资助基金：上海市科委资助课题064119529

在线出版日期：2010-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：450-453