携带K5基因突变体的腺病毒构建及K5蛋白表达

摘要：

目的 对血管生成抑制因子纤溶酶原Kringle 5(K5)基因进行突变.构建于重组腺病毒中,并观察突变后K5蛋白的表达情况.方法 用重叠延伸技术对K5基因Furin蛋白酶水解识别位点进行定点突变,分别构建携带K5基因和突变后的K5m基因表达框的腺病毒载体Ad-EF1α-K5/K5m;用RT-PCR法比较腺病毒感染TC-1细胞后K5和K5m mRNA的表达;用免疫沉淀和Western blot法比较腺病毒感染TC-1细胞后K5蛋白和突变后K5蛋白的表达.结果 成功对K5基因进行点突变,携带K5突变基因腺病毒K5蛋白表达量明显多于携带未突变K5基因腺病毒.结论 对K5基因Furin蛋白酶水解识别位点进行定点突变能提高腺病毒介导的K5蛋白分泌表达量,为进一步以腺病毒为载体携带K5基因在眼部新生血管异常增生性疾病的实验研究提供基础.

关键词：腺病毒、Kringle5、Furin蛋白酶

所属期刊栏目：35

分类号：Q754(分子遗传学)

资助基金：上海市自然科学基金项目032214116

在线出版日期：2009-02-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：852-856