P2X7受体在原代培养星形胶质细胞生长中的作用

摘要：

目的 探讨ATP是否促进原代培养的星形胶质细胞(astrocytes,As)发生类似反应性星形胶质化的变化以及嘌呤类受体P2X7在该过程中的作用.方法 原代As的分离和培养;实时照相观察As形态变化;用BrdU掺入法及流式细胞观察As增殖变化;用荧光标记实时定量PCR(real-time RT-PCR)检测GFAP mRNA,P2X7 mRNA,TGF-β1 mRNA表达的变化;用Western blot检测GFAP 表达; ELISA检测培养上清中TGF-β1的变化.结果 成功分离并培养原代As,免疫荧光鉴定阳性率为99%.不同浓度ATP(50 μmol/L,100 μmol/L,500 μmol/L)作用于As,均可使之表现出类似反应性胶质化的形态改变,表现为胞浆丰富,细胞突起增加且更为明显.ATP 100 μmol/L作用1 d后,As 的S期细胞数目明显增加,提示细胞增殖的活跃,5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromodeoxyuridine,5-BrdU)掺入法显示细胞核阳性率明显增加.500 μmol/L 浓度的ATP能促进As的 GFAP mRNA,P2X7 mRNA表达.用P2X7特异性的受体激动剂2′-3′-O-(4-benzoylbenzoyl)-adenosine-5′-triphosphate (BzATP) 50 μmol/L,75 μmol/L,100 μmol/L作用于原代培养的As,在培养基有Ca2+情况下可明显促进GFAP表达.在培养基有Ca2+的情况下BzATP作用2 h及12 h时As中TGF-β1 mRNA升高.培养上清中TGF-β1蛋白的含量在8 h 及48 h 均有升高.TGF-β1中和抗体能部分抑制P2X7引起的As GFAP含量的增加.结论 100 μmol/L的ATP可以促进As增殖.各种浓度ATP均可促进As形态产生类似胶质化反应的变化.P2X7特异性受体激动剂BzATP可引发胶质化样反应,并且在有Ca2+的情况下促进TGF-β1的转录和释放.TGF-β1参与了P2X7受体诱导的类似反应性星形胶质化过程.

关键词：ATP、原代培养星形胶质细胞、反应性星形胶质化、P2X7受体、TGF-β1

所属期刊栏目：34

分类号：R338.2(人体生理学)

资助基金：国家自然科学基金30500189

在线出版日期：2007-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：491-497