定量检测CCL20的竞争性内参照RT-PCR的建立及其初步应用

摘要：

目的建立检测趋化因子CC亚家族配体20(CCL20)表达水平的内参照定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法将人CCL20编码基因克隆到pbs-△ANK质粒中(PAL-2),将-42 bp的外源核苷酸片断插入到上述重组质粒的CCL20中间,构建内参照质粒PAL-2-IS.在该定量系统中以PAL-2-IS和PAL-2为模板,用CCL20的特异性引物扩增,根据扩增出的两个不同大小的条带的光密度扫描值对CCL20进行相对定量.结果将PAL-2与已知不同系列浓度的PAL-2-IS以内参照竞争定量RT-PCR共扩增定量PAL-2浓度,PAL-2计算浓度与实际浓度无差异(P＞0.05).在同一细胞数量水平(105数量级),内参照竞争定量RT-PCR检测表明:CCL20在L02、HepG2、Hepal、Hepa3中表达水平高于Hepa2,而在HepG2.2.15中最低.结论建立了检测CCL20表达水平的内参照定量RT-PCR方法,该方法可用于细胞中CCL20不同表达水平的检测.

关键词：趋化因子CC亚家族配体20、内参照、定量、竞争、逆转录聚合酶链反应

所属期刊栏目：32

分类号：R392.1

资助基金：国家自然科学基金39870009;国家自然科学基金39925031;教育部科学技术研究项目03063

在线出版日期：2005-06-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：359-364