点突变对结核分支杆菌KatG蛋白活性和结构的影响

摘要：

目的探讨点突变对结核分支杆菌KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和蛋白结构的影响,深入研究INH耐药的发生机制.方法采用三步法PCR对KatG基因的4个位点进行定点诱变,在大肠埃希菌BL21体系中表达和纯化相应诱变蛋白,并测定其过氧化氢酶、过氧化物酶活性、二硫键的形成及荧光光谱变化,最后利用酵母细胞色素C氧化酶模型进一步探讨点突变对KatG蛋白过氧化氢-过氧化物酶活性和结构的影响.结果完成KatG基因4个位点的诱变及相应诱变蛋白的表达和纯化.过氧化氢酶、过氧化物酶活性测定发现3个诱变蛋白[KatG(W321G)、KatG(R418Q)和KatG(A456S)]活性基本丧失,诱变蛋白KatG(S315T)活性也有明显下降.荧光光谱显示KatG(R418Q)和KatG(A456S)的荧光强度较野生型明显降低.4个点突变均不影响KatG蛋白间二硫键的形成.结论所引入的4个突变可能对KatG蛋白的结构造成影响,从而导致KatG蛋白的功能即过氧化氢-过氧化物酶活性下降.

关键词：结核分支杆菌、KatG、过氧化氢-过氧化物酶、荧光光谱、酵母细胞色素C氧化酶

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分类号：R378.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技攻关项目2001BA705B03

在线出版日期：2004-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：24-27