葡萄球菌肠毒素B突变体的纯化及其活性

摘要：

目的从基因重组菌中纯化葡萄球菌肠毒素B(SEB)突变体及其野生型蛋白，研究其毒力及抗原性。方法表达野生型SEB蛋白(SEB-N)和SEB突变体(SEB-M23、SEB-150)的3株重组菌经IPTG诱导，反复冻融后，制备细菌裂解液。将初步纯化的抗SEB抗血清与CNBr活化的Sepharose 4B作共价偶联，制成亲和层析柱。分柱纯化SEB-N、SEB-M23和SEB-M150蛋白。用SDS-PAGE和酚试剂改良法对纯化蛋白作纯度鉴定和定量；用双向免疫扩散试验和ELISA法作抗原性鉴定；用小鼠致死性试验作毒力鉴定。结果 SDS-PAGE和双向免疫扩散试验表明，3种纯化蛋白均为单一条带，且都能与抗SEB抗体形成明显的沉淀线。ELISA表明SEB-N、SEB-M23、SEB-M150与抗SEB抗体有相似的结合力，提示23位突变和150位突变并未改变SEB的抗原表位。小鼠致死性试验表明，LPS激发的3组小鼠(6只/组)，分别用上述纯化蛋白攻击(10μg/只)，SEB-N组死亡率为5/6;SEB-M150组死亡率为4/6；SEB-M23组死亡率为0/6；即使SEB-M23剂量增至200 μg，小鼠仍无死亡。结论获得了SEB-N、SEB-M23和SEB-M150 3种纯化蛋白，其中SEB突变体都保留了抗原性；SEB-M23与野生型SEB相比，毒力明显下降。为进一步研究其作为新型淋巴细胞激活分子或超抗原疫苗打下基础。

关键词：葡萄球菌肠毒素B、突变体、纯化、毒力、抗原性

所属期刊栏目：28

分类号：R378.1+1(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：187-190