融合蛋白表达系统制备人组织因子

摘要：

组织因子(tissue factor, TF)是一种跨膜糖蛋白，它既是凝血因子Ⅶ(FⅦ)的细胞表面受体，又是FⅦ或激活的FⅦ(FⅦa)的辅因子。它作为凝血途径的启动子，触发凝血过程。作为细胞受体超家族的一员，TF的表达还与肿瘤组织的转移有关，通过血管生成间接参与肿瘤生长［1］。
TF也是凝血活酶试剂的主要成分，长期以来从人、牛、兔的脑或肺中提取，用来检测凝血酶原时间(prothrombin time,PT)。不同动物组织来源的凝血活酶的敏感度不同，给临床医师用药带来了极大的困难。近年来，基因重组技术的出现为PT试验提供了新一代标准化试剂——重组凝血活酶。它由大肠杆菌表达，蛋白质均一稳定，为WHO推荐的新一代凝血活酶试剂之一，其敏感度趋向统一。重组TF消除了不同来源试剂ISI值尚存在的差异因素，对凝血因子缺乏具有极高的敏感性，准确性好，提高了PT试剂的质量，向PT试验的标准化又迈进了一步［2］。
为此，我们将TF基因插入到谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase，GST)中，探索了人TF的融合表达。
材料和方法
质粒及菌株表达质粒pGEX 4T-1由Phamacia 公司提供，pUC-TF(携有TF的cDNA)由本科构建，大肠杆菌BL21(E.coli BL21)由中国科学院典型培养物保藏委员会基因库提供。
工具酶及试剂限制性内切酶BamH1、Xho1及Taq DNA聚合酶购自宝灵曼公司；T4 DNA连接酶、PCR Marker、IPTG购自Promega公司；蛋白质相对分子质量Marker由华美公司提供；DNA序列分析由上海基康公司完成。Redipack GST Purification Module购自Pharmacia 公司。TF ELISA测定试剂盒为American Diagnostica Inc公司产品。

关键词：组织凝血活酶、聚合酶链反应、融合蛋白

所属期刊栏目：27

分类号：K446.11+9

资助基金：上海市卫生系统"百人计划"

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：468-470