10.3969/j.issn.1672-8467.2000.04.020
利用新型表达载体pc DNA 3.1/Myc His表达sIL 4受体
@@ 近二十年来,分子生物学技术飞速发展,并在各个领域得到了广泛的运用。通过构建目的基因表达质粒转化细菌或转染细胞,合成重组蛋白质技术日臻成熟[1]。在抗体制备方面,传统的方法是通过分离、纯化抗原,免疫动物制备相应抗体。而要得到一定量纯度较高的抗原往往困难较大且过程烦琐,特别是一些表达量较低的抗原,尤为困难。随着分子生物学技术的发展,利用基因工程合成蛋白质成为可能,为制备高质量抗原开辟了新的领域。现介绍利用一种新的在哺乳动物细胞中高效表达的载体pc DNA 3.1/Myc?His,合成重组大鼠可溶性IL?4受体(sIL?4R)蛋白。
材料和方法
RT?PCR扩增sIL?4R基因片段雄性5周龄Wistar大鼠1只,取脾脏,液氮内速冻,利用Isogen RNA抽提试剂(日本基因公司,日本),参照说明书推荐方法,一步法提取总RNA。电泳鉴定RNA完整未降解,测OD 260/280值定量。取2 μg总DNA,以MULV逆转录酶(Toyobo公司,日本)常规方法逆转录反应合成cDNA[2]。
基因工程、重组蛋白质、pcDNA 3.1/Myc-His质粒、瞬时表达
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R392.11
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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298-299,301