大鼠阴道细胞涂片技术及其HE染色方法的研究

摘要：

目的:探索制备大鼠阴道细胞涂片的最佳方法,为实验中判断雌性大鼠的动情周期提供参考.方法:60只SD雌性大鼠,随机分为6组,每组10只,分别用不同方法制备阴道细胞涂片,共10 d.空白组正常饲养;常规棉签组10 cm无菌棉签用生理盐水浸湿插入大鼠阴道内(深度约1 cm),单向旋转3圈,蘸取脱落细胞,逆向均匀地涂在载玻片上;自制棉签组自制无菌棉签(较常规棉签头外径小),操作同常规棉签组;20μl移液枪组、40μl移液枪组、80μl移液枪组分别采用20μl、40μl和80μl 3种不同刻度的移液枪,吸取20μl、40μl和80μl生理盐水打入大鼠阴道内(深度约1 cm),反复吹打3次,吸出阴道液均匀地涂在载玻片上.涂片晾干后,经苏木精-伊红染色(HE染色),在显微镜下分别观察HE染色前后阴道涂片细胞分布情况,并记录每只大鼠的动情周期变化,比较不同制备方法对大鼠动情周期的影响.同时,每日尾静脉采血对大鼠血清性激素水平进行连续性检测,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清中促卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)水平连续变化情况,共10 d.结果:棉签插入阴道滞涩,采集阴道细胞量少,细胞分布不均匀,呈"条带"样排列;染色后,细胞脱落明显,易脱片,细胞较少,可勉强判断动情周期;常规棉签与自制棉签比较,镜下观察结果相似,常规棉签采集阴道细胞较多.移液枪插入阴道顺畅,采集细胞量多,随着吸取生理盐水量的增加,细胞分布表现为由密集重叠到相对均匀;染色后,细胞较多,细胞形态清晰,动情周期易辨.尤以80μl移液枪为宜.棉签法长时间刺激会导致大鼠动情周期紊乱,主要表现为动情周期延长;移液枪冲洗法对大鼠动情周期影响较小,移液枪组与常规棉签组动情周期紊乱率比较,差异有统计学意义(P<0.01).棉签组血清中FSH、E2水平变化无周期性、规律性变化,第5天、第6天、第8天与空白组比较,差异有统计学意义(P<0.05);80μl移液枪组大鼠血清中FSH、E2水平呈周期性变化,较有规律,与空白组水平变化趋势相近,差异无统计学意义(P>0.05).结论:本研究阴道涂片的制备方法中80μl移液枪组最佳,对大鼠动情周期变化影响较小,性激素水平变化趋势与空白组大鼠相近,即用80μl移液枪冲洗涂片法观察大鼠动情周期清晰易辨,影响较小.

关键词：动情周期、阴道细胞涂片、苏木精-伊红染色(HE染色)、大鼠

所属期刊栏目：24

分类号：R-332(医学研究方法)

资助基金：山西省教育厅研究生创新项目;山西中医药大学研究生创新项目

在线出版日期：2023-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：45-51