基于ΦC31整合酶和载体质粒pUASTattB的12株果蝇转基因阴性对照品系的建立

摘要：

目的 构建基于ΦC31整合酶和载体质粒pUASTattB的果蝇转基因系统的阴性对照品系,为转基因果蝇研究实验提供更科学的阴性对照.方法 用显微注射法将载体质粒pUASTattB(可携带目的基因完成定点插入的常用载体质粒)转入携带ΦC31整合酶的4种不同遗传背景的果蝇品系attP-25C6、attP-68A4、attP-75B1和attP-86F8胚胎中,培养获得G0代成虫后将每只G0代成虫分别与平衡子果蝇品系ywR13S做单管杂交(每管中G0代成虫1只与ywR13S 3只进行杂交),通过观察G1代果蝇的复眼颜色,判断是否有mini-White插入,计算成功插入的概率.再选取成功插入mini-White的G1代果蝇成虫与3种平衡子果蝇品系DB、ywR13S和yw122分别做单管杂交(1只G1代雄果蝇与3只平衡子品系处女蝇杂交),平衡保种.提取保种好的果蝇品系基因组DNA,用PCR法鉴定载体质粒pUASTattB转入情况.结果 4种不同遗传背景的果蝇成功显微转入pUASTattB质粒后,再用3种平衡子果蝇品系进行平衡保种,得到 12株果蝇品系,均为携带mini-White标记的红眼果蝇,PCR鉴定表明有pUASTattB序列插入.结论 12株转基因果蝇品系可基本满足以pUASTattB为载体构建的转基因果蝇研究实验的阴性对照需求,丰富了国家果蝇资源中心的果蝇资源.

关键词：黑腹果蝇、转基因、阴性对照、显微注射、平衡子

所属期刊栏目：43

分类号：R-332;Q95-33(医学研究方法)

资助基金：国家重点研发计划;线虫发育代谢资源库的系统构建与分析专项

在线出版日期：2023-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：541-547