小鼠肝炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立及在部分啮齿类动物的应用

摘要：

目的 建立小鼠肝炎病毒(MHV)实时荧光定量PCR检测方法,并初步应用于实验裸鼹鼠等啮齿类动物的检测.方法 选择MHV E基因保守区域设计合成特异性引物和探针,建立荧光定量PCR方法,并对方法特异度、敏感度、线性、重复性和稳定性进行方法学验证.同时用建立的方法对79只清洁级小鼠、35只SPF小鼠、63只裸鼹鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠进行MHV检测.结果 成功建立了MHV实时荧光定量PCR方法;方法的线性范围为(1×101 ～1×109)拷贝/μL,与仙台(SV)病毒、呼肠孤病毒3型(Reo3)、小鼠肺炎病毒(PVM)、牛冠状病毒(BCV)均无交叉反应,方法的检测敏感度为10拷贝/μL.重复性和稳定性试验显示实验间变异系数均小于5％.检测结果显示63只裸鼹鼠、35只SPF小鼠、10只长爪沙鼠、20只金黄仓鼠和4只黄鼠均为阴性.79只清洁级小鼠MHV阳性率为22.78％.建立的方法与RT-PCR比较,可信度达97.47％.结论 建立的MHV荧光定量PCR方法特异、敏感,能够对多种啮齿类动物体内携带的MHV进行检测.

关键词：小鼠肝炎病毒、实时荧光定量PCR方法、啮齿类动物

所属期刊栏目：40

分类号：R372;Q93-335(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技支撑计划2015BAI09B02

在线出版日期：2020-11-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：95-103