猴D型逆转录病毒p27基因的克隆表达及诊断价值评价

摘要：

目的 克隆表达猴D型逆转录病毒(SRV) p27基因,评价其诊断价值.方法 PCR扩增p27基因片段,定向克隆至原核表达载体pET-28b(+),重组质粒转化大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达,利用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定,目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后用ELISA方法评价其诊断价值.结果 重组质粒转化宿主菌后在37℃,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓-度为0.5 mmol/L的条件下诱导4h,可溶性p27蛋白表达量最大,且具有免疫学活性.纯化后测定融合蛋白浓度为2.043 g/L,纯度93.3％,以融合蛋白为诊断抗原包被ELISA板检测3份标准阳性血清和22份阴性血清,检出率为100％.结论 p27基因成功表达并具有良好的反应原性,可作为猴D型逆转录病毒血清学检测的候选抗原.

关键词：猴D型逆转录病毒、p27基因、原核表达、血清学检测

所属期刊栏目：36

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：上海市科委科技创新行动计划13140900600;上海市科委研发平台专项15DZ2292400

在线出版日期：2016-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：270-275