精原干细胞体内转染途径建立rsP3111转基因小鼠的可行性研究

摘要：

目的 构建目的 基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的 基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达.为进一步通过精原千细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础.方法 将rsp311l基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer-N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer-N1-rsP3111.采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer-N1-rsP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer-N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达.结果 PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中.荧光检测结果表明,目的 基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达.结论 通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rsP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表达;为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础.

关键词：雄性生殖细胞载体法、特异性基因rsp3111、体外受精

所属期刊栏目：28

分类号：Q492

资助基金：国家自然科学基金面上项目30571968;上海市人口和计划生育委员会局管科技发展基金项目05JG05009

在线出版日期：2009-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：138-143