具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备

摘要：

目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层.方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和Southern blot鉴定.结果经300μg/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southern blot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞.结论本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础.

关键词：NIH3T3细胞、潮霉素B磷酸转移酶基因、转染、潮霉素B抗性、ES细胞

所属期刊栏目：25

分类号：Q95-33(动物学)

资助基金：国家自然科学基金30070353

在线出版日期：2005-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：131-135