三角帆蚌IGF2基因的亚细胞定位及重组蛋白促体外细胞活性分析

摘要：

胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factors 2,IGF2)在多种细胞生长、分化和合成代谢的调节中发挥重要的调控作用.本研究成功构建了淡水珍珠贝三角帆蚌IGF2的重组质粒pEGFP-IGF2和pET32a-IGF2,通过pEGFP-IGF2-细胞转染,表明该蛋白定位在细胞质与细胞核中.将pET32a-IGF2转化到BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达,成功得到其原核表达载体,SDS-PAGE检测显示,在约25ku处有一条清晰的条带,符合目的条带大小(26.27 ku),且主要表达于上清液中.为研究重组蛋白IGF2对三角帆蚌细胞活性的作用,通过CCK8细胞活性测定,进一步探讨了添加不同质量浓度重组目的蛋白(0、2.5、5.0、7.5、12.5、17.5、22.5μg/mL)培养的三角帆蚌外套膜细胞增殖活性.结果显示,三角帆蚌IGF2重组蛋白能显著促进三角帆蚌外套膜细胞的增殖活性(P<0.05),且在其质量浓度为12.5μg/mL时对三角帆蚌外套膜细胞的促生长效果最佳,这为促进三角帆蚌外套膜细胞传代、细胞系建立奠定了基础,也为下一步探究IGF2在贝类中的功能提供依据.

关键词：三角帆蚌、IGF2、亚细胞定位、重组蛋白、细胞培养、生物活性

所属期刊栏目：31

分类号：S917(水产基础科学)

资助基金：国家重点研发计划;国家自然科学基金;上海市学术研究带头人计划

在线出版日期：2023-01-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1335-1341