副溶血性弧菌vtrB基因敲除菌株的构建及其在抵抗胆汁中的作用

摘要：

构建副溶血性弧菌转录调节因子VtrB(V.parahaemolyticus T3SS2 regulator B)敲除菌株和回补菌株,探讨VtrB在副溶血性弧菌抵抗胆汁中的作用.根据GenBank数据库中副溶血性弧菌vtrB基因上下游序列设计引物,通过融合PCR将vtrB基因上下游同源臂融合并克隆入自杀质粒pDS132中,将重组自杀质粒转入大肠杆菌S17-1 λpir中,再接合转移至副溶血性弧菌中进行同源重组,通过10％蔗糖筛选获得vtrB基因突变株△vtrB.将pBAD33-vtrB重组质粒电转入△vtrB突变株中获得回补菌株C-△vtrB.研究副溶血性弧菌野生型、突变株和回补株在2％脱氧胆酸盐(DOC)处理后的存活率.基于同源重组原理,经vtrB基因的PCR扩增和转录水平检测结果表明,成功获得副溶血性弧菌vtrB基因缺失突变株△vtrB和回补株C-△vtrB.与野生型和回补菌株C-△vtrB相比,△vtrB突变株在2％DOC处理20、40和60 min后的存活率分别为17％、4％和1％,vtrB基因的失活使得副溶血性弧菌对胆汁抵抗能力极显著降低(P＜0.001),表现出存活能力的缺陷.由此表明,转录调节因子VtrB有助于副溶血性弧菌对胆汁的抵抗.

关键词：副溶血性弧菌、vtrB基因、基因敲除、同源重组、胆汁抵抗

所属期刊栏目：30

分类号：S933(水产资源)

资助基金：上海市科技兴农科技攻关计划重点项目;上海市科委平台能力建设项目

在线出版日期：2021-08-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：555-563