斑点叉尾鮰LEAP2成熟肽在毕赤酵母中的表达及其抑菌活性
LEAP2 (Liver expressed antimicrobial peptide-2)抗菌肽是一类主要在动物肝脏中表达的小分子肽,它们在动物的免疫系统中发挥了重要作用.斑点叉尾鮰(Ictalurus puactatus)LEAP2的一级结构由信号肽和原前体肽组成;原前体肽由66个氨基酸残基组成,近羧基端的41个残基组成了其成熟肽区域(mLEAP2),该区域决定了LEAP2的生物学活性.本文以斑点叉尾鮰mLEAP2为研究对象,通过建立毕赤酵母表达系统,实现了mLEAP2在毕赤酵母中的重组DNA表达,优化的表达条件为:29℃、pH 6、250 r/min、0.5％甲醇、120 h.Tricine-SDS-PAGE分析表明:表达产物经固化金属离子亲和层析(IMAC)纯化后,获得了高纯度的目的蛋白.经Folin-酚法测定,纯化产物的浓度为0.22 mg/mL,推算至表达量为2.2 mg/L.进一步通过MALDI-TOF/TOF质谱分析对纯化产物的结构进行鉴定,结果证明:获得的纯化产物为预期的重组体mLEAP2(mLEAP2).此外,抑菌实验结果显示rmLEAP2具有明显的抑制枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的活性.
斑点叉尾鮰、LEAP2成熟肽、毕赤酵母、重组DNA表达
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S917(水产基础科学)
上海市教委产学研项目;农业部都市农业南方重点实验室开放基金
2017-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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