草鱼抗病毒基因Mx全长cDNA的克隆、序列分析与真核表达载体构建
Mx蛋白是一类由I型干扰素（IFN）诱导表达的抗病毒蛋白。以PolyI∶C诱导的草鱼（Ctenopharyngodon indellus）肾细胞（CIK cells）为材料,抽提细胞总RNA,通过RT-PCR的方法扩增出Mx基因cDNA全序列,连接至pMD20-T载体上,构建重组质粒pMD20-T-Mx,并测序进行序列分析。用限制性内切酶从克隆的重组质粒pMD20-T-Mx上切下Mx基因,插入到质粒pEGFP-C1中,构建真核表达载体pEGFP-C1-Mx。结果显示,该基因cDNA全序列为1 921 bp,阅读框共编码627个氨基酸,分子量约为71.1 ku,理论等电点pI为8.33,其编码的Mx蛋白具有脊椎动物Mx蛋白共有的结构特征：一个三联体GTP结合区域和一个发动蛋白家族的典型结构特征序列。生物信息学分析表明,草鱼Mx基因所编码的蛋白质以亲水区域为主,具有丰富的B细胞抗原位点,但无明显的核定位序列,空间结构包括N端的GTP酶结构域（GTPase domain）、中间的中央相互作用结构域（central interactive domain,CID）和C端的GTP酶效应结构域（GTPase effector domain,GED）。同源性分析显示,草鱼Mx蛋白氨基酸序列和其他物种的相似性为45.1%～99.7%。此外还成功构建了含草鱼Mx基因cDNA全序列的真核表达载体pEGFP-C1-Mx。研究亮点：首次通过干扰素诱生剂PolyI∶C诱导草鱼肾细胞的方法克隆得到了草鱼抗病毒基因Mx cDNA全序列,并且借助生物信息学软件对其编码的氨基酸进行了序列分析,还成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-Mx,为进一步研究草鱼Mx蛋白的生物学活性及其在抗鱼类病毒性疾病中的应用奠定基础。
草鱼、Mx基因、克隆、序列分析、载体构建
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S917(水产基础科学)
浙江省大学生科技创新活动计划新苗人才计划;浙江省自然科学基金;湖州市自然资金项目
2012-09-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
502-508
