三疣梭子蟹微卫星文库的构建及序列分析
采用磁珠富集法筛选三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的微卫星序列.经Sau3AI酶切后的200～1 000 bp DNA纯化片段,与两端已知序列的人工接头连接,用含有生物素标记的(CA)12和(GA)12探针杂交,根据磁珠的链酶亲和素与生物素特异结合的特性,捕获含微卫星序列的单链DNA,以此为模板用人工接头序列为引物进行PCR扩增,随后将获得的片段连接到PMD18-T载体上,转化至DH5α感受态细胞中,成功构建了微卫星富集文库.测序其中的60个阳性克隆,得到42条微卫星序列(基因登录号为:HQ283153-HQ283194),除探针使用的CA/GT、GA/CT重复外,还得到GAGT重复序列.42条微卫星序列中,完美型31个(占73.8%),非完美型9个(占21.4%),混合型2个(占4.8%).完美型的比例显著高于非完美型,这与其他真核生物微卫星序列的特征相一致.39条微卫星序列的重复次数大于10(占92.9%),其中,重复次数在10～19次之间的有27个,20次以上的有12个.筛选出的微卫星位点可为今后三疣梭子蟹遗传多样性评价、种群遗传结构鉴定及资源保护研究提供一套有用的分子标记.
三疣梭子蟹、磁珠富集法、筛选、微卫星、多态性
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S917(水产基础科学)
国家自然科学基金;上海市科委青年科技启明星人才计划项目
2011-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
728-733
