大豆高盐胁迫下根部组织酵母双杂交文库的构建与分析

摘要：

为了高效研究大豆耐非生物胁迫的分子调控网络,运用SMART(Switching Mechanism at 5'End ofthe RNA Transcript)与DSN (Duplex-Specific Nulease)相结合的技术构建了栽培大豆高盐胁迫下根部组织的酵母双杂交cDNA文库.提取高质量的总RNA,利用Oligo (dT)16引物反转录合成cDNA后,经DSN处理,然后利用Advantage 2聚合酶进行长片段PCR扩增,电泳检测显示,产物均一,无高丰度条带,片段范围在0.75～5.00 kb;RT-PCR结果显示,GmActin基因在均一化后表达明显降低,表明均一化效果较好;最后通过SMART同源重组交换技术在酵母菌株Y187中构建了酵母双杂交所需的cDNA文库.文库质量检测结果表明:cDNA文库的总独立克隆数为5.61×106c fu、文库滴度为3.4×1010cfu/mL、重组率大于90％、插入片段长度为0.5～3.0 kb,主要集中在1.0 kb左右.

关键词：大豆、根、酵母双杂交文库、耐盐性、互作蛋白

所属期刊栏目：29

分类号：S565.1;Q78(经济作物)

资助基金：国家自然科学基金资助项目31101166;江苏省农业科技自主创新资金项目cx123068;江苏省自然科学基金BK2010474;国家十二五科技支撑计划2011BAD35B06-4-3

在线出版日期：2014-01-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：20-23