百子莲茎尖分生组织蛋白双向电泳体系的建立

摘要：

以‘蓝色大花’百子莲(Agapanthus praecox ssp.orientalis ‘Big blue’)茎尖分生组织为材料,对比研究了不同提取与裂解方法制备蛋白样品以排除多酚、多糖及核酸物质对蛋白双向电泳体系(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)的干扰.提取过程采用TCA/丙酮沉淀法和超声波破碎法;蛋白裂解过程中分别使用苯甲基磺酰氟(Phenylmethanesulfonyl Fluoride,PMSF)和乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid,EDTA)、Cocktail(广谱性)蛋白酶抑制剂、核酸酶Nuclease Mix和2-D Clean-Up蛋白纯化试剂盒.制备的各蛋白样品经过7 cm IPG (pH 3～10)胶条上样、电泳后发现,使用TCA/丙酮沉淀法提取蛋白,裂解液中加入Cocktail蛋白酶抑制剂裂解后,用2-D Clean-Up试剂盒所制备的样品其双向凝胶电泳图谱效果最好,获得蛋白点数量最多,且蛋白等电点pI主要分布于4～8之间.随后,应用分辨率更高的24 cm IPG (pH 4～7)胶条进行电泳效果的验证,蛋白点在凝胶的2个方向上均得到了较好地分离,经过ImageMaster 2-D Platinum5.0软件分析后共检测到有效蛋白点820个.本研究初步建立了百子莲茎尖分生组织蛋白双向凝胶电泳体系,为后续开展百子莲属植物蛋白质组学研究提供了重要的技术保障.

关键词：百子莲、茎尖分生组织、蛋白提取、蛋白酶抑制剂、双向凝胶电泳

所属期刊栏目：33

分类号：S682.32(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：国家自然科学基金31300580,31370695;中国博士后科学基金特别资助项目2013T60451

在线出版日期：2015-08-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共10页

页码：43-52