百子莲胚性愈伤组织玻璃化法超低温保存体系建立及遗传稳定性分析

摘要：

采用单因素随机区组试验及多因素、多水平正交试验方案建立了百子莲胚性愈伤组织(embryogenic callus,ECs)玻璃化法超低温保存体系.将由花梗诱导的胚性愈伤组织接种至预培养基(MS+0.5 mol/L蔗糖+1％琼脂)上,在4℃下预培养2d后,在室温下加入装载液(MS+0.4mol/L蔗糖+2 mol/L丙三醇+10 mmol/L KNO3)处理60 min;利用改良后的PVS 2玻璃化溶液(MS+0.4 mol/L蔗糖+30％丙三醇+15％乙二醇+15％ DMSO)在0℃下处理40 min,将含有ECs的冻存管投入液氮中冻存1h;在40℃水浴中快速解冻90 s;用洗涤液(MS+1.2 mol/L蔗糖+ 10 mmol/L KNO3)处理30 min,每10 min换1次新鲜的洗涤液;洗涤后,接种到胚性愈伤组织增殖培养基上恢复培养24 h后,相对成活率分别达56.9％(TTC法)和43.3％(Evans blue法).恢复培养55 d的百子莲胚性愈伤组织经过AFLP多态性检测后未发现基因组变异,证明该方法可用于百子莲种质资源的超低温保存.

关键词：百子莲、胚性愈伤组织、玻璃化法超低温保存、遗传稳定性、AFLP

所属期刊栏目：32

分类号：S682.32(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：国家自然科学基金31170655、31370695和31300580

在线出版日期：2014-12-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：76-83,94