2种不同方法制备玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的ssDNA文库的比较

摘要：

体外合成全长为71个碱基的随机ssDNA文库,采用SELEX技术,以玉米赤霉烯酮单克隆抗体为靶蛋白,微孔板为筛选介质进行筛选.通过对比不对称PCR法和生物素—链霉亲和素磁珠2种分离方法制备ssDNA文库的效果,确定了以生物素—链霉亲和素磁珠分离方法制备ssDNA为优选方法.ssDNA文库扩增为双链DNA(dsDNA)文库的PCR反应条件为:退火温度50℃,循环数20次.不对称PCR退火温度为50℃,最佳循环数为30次,引物Ⅰ与引物Ⅱ的比例为80∶1.此反应条件下,ssDNA文库PCR扩增的条带清晰、稳定、特异性高.生物素—链霉亲和素磁珠法为有效筛选特异性强的玉米赤霉烯酮单克隆抗体适配子的优选技术方案,为适配子SELEX筛选奠定基础.

关键词：玉米赤霉烯酮单克隆抗体、适配子、SELEX、ssDNA文库

所属期刊栏目：31

分类号：TS207.5(食品工业)

资助基金：国家863计划项目2007AA10Z424

在线出版日期：2013-11-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：54-60