抗鸡传染性支气管炎病毒单链抗体间接ELISA筛选方法的建立

摘要：

建立一种筛选特异性单链抗体的间接ELISA优化方法.用鸡传染性支气管炎病毒IBV-M41株接种SPF鸡胚,纯化后作为抗原包被96孔板进行间接ELISA,从本实验室构建的原核表达质粒pOPE101-XPscFv/JM109(DE3)中筛选出针对IBV-M41株的scFv,并对各反应参数进行探索,优化筛选方法.通过敏感性实验、交叉性实验、重复性实验评估优化后的筛选方法.优化的反应条件为,包被抗原1:20稀释(61.36μg/mL),4℃包被过夜;2%脱脂奶粉37℃封闭1 h;含可溶性scFv的待测样品1:100稀释(142.7μg/mL),37℃作用2 h;MYC鼠单抗1:2 000稀释,37℃作用2 h;羊抗鼠抗抗体1:4 000稀释,37℃作用1 h.敏感性实验显示样品中的scFv浓度的最低检出量为17.83μg/mL;特异性实验显示筛选出的scFv只与IBV-M41株特异性结合;重复性实验的板间、板内变异系数分别为2.78%、2.56%.建立的筛选scFv的间接ELISA方法有较好的敏感性、特异性、稳定性,为scFv的深入研究奠定基础.

关键词：单链抗体、传染性支气管炎、间接ELISA、筛选

所属期刊栏目：29

分类号：S858.31(动物医学（兽医学）)

资助基金："上海交大-美国Raybiotech联合开展抗体工程研究"科技合作项目

在线出版日期：2011-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：64-68,82