大肠杆菌VT噬菌体受体基因重组质粒的构建

摘要：

取含有卡那霉素抗性(KanR)基因的自杀性质粒pJP5603和含vpr全长基因的pUC19phiΦRID质粒,分别采用粘性末端及平末端两种连接法.2种质粒Hinc Ⅱ单酶切后进行平末端连接,经鉴定未得到重组质粒.pJP5603用Hinc Ⅱ和Xma I消化,回收3kb的载体质粒,pUC19ΦRID用Hinc Ⅱ和Age Ⅰ消化,回收778 bp vpr目的基因.通过粘性末端连接,转化到感受态细菌CC118λpir,利用KanR进行筛选,获得的克隆经Acc Ⅰ酶切鉴定和PCR检测,确定得到重组质粒,即pYYvpr.将重组质粒的DNA转化到含有全长vpr基因的感受态细胞MC1061,筛选到的克隆经PCR检测,得到一株克隆既扩增出vpr基因,又扩增出KanR基因,初步鉴定该克隆为MC1061的vpr同源基因突变株,暂定名为MC1061△vpr.从而为研究vpr基因的功能提供了重要的试验材料.

关键词：质粒、vpr基因、酶切、重组、转化、PCR

所属期刊栏目：20

分类号：S852.612(动物医学（兽医学）)

资助基金：上海交通大学校科研和教改项目2002～2004

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：85-89,94