抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的研制及其抗原识别表位初步鉴定

摘要：

研制抗人α-烯醇化酶的单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步研究.利用原核表达系统对人α-烯醇化酶进行一系列重组表达.表达纯化后的人α-烯醇化酶作为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术以及克隆化培养筛选稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株,采用免疫荧光技术、免疫组化技术对此单克隆抗体加以验证,并应用噬菌体随机十二肽库展示技术结合生物信息学方法对抗体识别表位进行初步鉴定.结果显示,克隆表达了人α-烯醇化酶,筛选获得一株稳定分泌抗人α-烯醇化酶单克隆抗体细胞株,此单克隆抗体的亚型为IgG1,它可与腹腔巨噬细胞的胞膜及胞浆的烯醇化酶特异性结合.噬菌体随机十二肽库展示技术筛选出的氨基酸序列经生物信息学分析,初步确定此单克隆抗体的抗原表位为第259-262氨基酸与第267-269氮基酸,其恰好位于人α-烯醇化酶三维结构表面的凸环上.成功制备了一株抗人α-烯醇化酶单克隆抗体并对其抗原识别表位进行初步鉴定,为探究人α-烯醇化酶在人体病理生理活性中的作用提供了研究工具.

关键词：烯醇化酶、单克隆抗体、免疫荧光、免疫组化、噬菌体展示技术

所属期刊栏目：35

分类号：R392.11

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;湖北省自然科学基金重点项目;中央高校基本科研业务费专项

在线出版日期：2015-10-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：393-398