具核梭杆菌来源的外膜囊泡对口腔上皮细胞闭合蛋白Claudin-4表达的影响
目的:探讨具核梭杆菌(Fusobacteriumn nucleatum,F.n)分泌的外膜囊泡(outer membrane vesicles,OMVs)对人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)闭合蛋白Claudin-4表达及其对口腔上皮屏障功能的影响.方法:厌氧条件下培养具核梭杆菌,透析法提取OMVs.采用Nanosight及透射电镜(transmission electron microscopy,TEM)对提取的OMVs进行表征分析.OMVs以不同质量浓度(0～100 μg/mL)刺激HOK 12 h,并以100μg/mL OMVs刺激HOK6、12h,采用实时转录PCR和蛋白质印迹法分析闭合蛋白Claudin-4在基因和蛋白水平的表达;倒置荧光显微镜观察HOK与OMVs共定位以及Claudin-4蛋白的定位分布.利用Transwell上室体外构建人口腔上皮屏障,采用跨膜电阻测量仪(EVOM2)检测屏障跨上皮电阻(transepithelial electrical resistance,TER),以异硫氰酸荧光素-右旋糖酐(FD-4)渗透率评估屏障通透性.采用GraphPad Prism 8.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与对照组相比,OMVs刺激组HOK中Claudin-4在蛋白水平和基因水平表达均显著降低(P＜0.05).免疫荧光显示,细胞间Claudin-4的荧光连续性表达被破坏.与对照组相比,OMVs刺激可降低口腔上皮屏障的TER值(P＜0.05),提高FD-4的透过率(P＜0.05).结论:具核梭杆菌来源的OMVs能通过抑制闭合蛋白Claudin-4表达,损伤口腔黏膜上皮的屏障功能.
口腔扁平苔藓、上皮屏障功能、具核梭杆菌、外膜囊泡、Claudin-4
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R781.5(口腔科学)
国家自然科学基金82101008
2023-06-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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