miR-199a调控IGF1表达对机械刺激下成骨细胞分化的影响
目的:探讨微小RNA(miR)-199a在机械牵张力刺激下MC3T3-E1细胞中的表达变化及其对牵张力刺激MC3T3-E1细胞成骨分化的作用机制.方法:对体外培养的MC3T3-E1细胞加载12％牵张力0、3、6、12和24 h后,利用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性,实时荧光定量PCR检测骨钙素(OCN)、成骨细胞特异性转录因子Osterix(OSX)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA和miR-199a的表达.将MC3T3-E1细胞分为对照组、牵张力组、牵张力+miR-NC组和牵张力+miR-199a组,加载12％牵张力和转染miR-199a模拟物后,观察miR-199a和OCN、OSX、Runx2mRNA及蛋白表达以及ALP活性.茜素红S(ARS)染色观察钙结节形成能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a与胰岛素样生长因子1(IGF1)的靶向关系,实时荧光定量PCR法和免疫印迹法检测miR-199a模拟物对IGF1 mRNA和蛋白表达的影响.采用SPSS 24.0软件包对数据进行统计学分析.结果:与O h时间点相比,以机械牵张力刺激3、6、12和24 h后,MC3T3-E1细胞ALP活性和OCN、OSX、Runx2 mRNA表达水平均显著升高,而miR-199a表达水平显著降低(P＜0.05),12h时变化最为显著.与对照组相比,牵张力组细胞中miR-199a表达水平显著降低,而细胞ALP活性、OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达水平、钙结节形成水平均显著升高(P＜0.05);与牵张力组相比,牵张力+miR-NC组细胞中上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05);与牵张力+miR-NC组相比,牵张力+miR-199a组细胞中miR-199a表达水平显著升高,而细胞ALP活性、OCN、OSX、Runx2 mRNA及蛋白表达水平、钙结节形成水平均显著降低(P＜0.05).miR-199a可与IGF1靶向结合,miR-199a模拟物可使MC3T3-E1细胞中IGF1 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P＜0.05).结论:miR-199a可抑制机械牵张力刺激诱导的MC3T3-E1细胞成骨分化,其作用机制可能与靶向调控IGF1表达有关.
成骨分化、机械刺激、微小RNA-199a、胰岛素样生长因子1
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Q274(细胞生物物理学)
河北省医学科学研究课题计划项目20200506
2022-06-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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132-137
