牙髓卟啉单胞菌内毒素对成骨细胞分化的抑制作用
目的:研究牙髓卟啉单胞菌脂多糖(P.e-LPS)对成骨细胞分化的影响,探讨P.e-LPS在根尖周骨吸收疾病中的致病机制.方法:厌氧条件下培养P.e,应用热酚水法提取P.e-LPS,采用凝胶鲎试剂法对所提取的LPS进行定性分析.应用成骨细胞分化培养基(50μg/mL抗坏血酸、6 mmol/Lβ甘油磷酸钠)诱导前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨细胞分化.实时定量PCR(RT-PCR)检测成骨分化基因Distal-less homeobox 5(DLX5)、Runt-related transcription factor 2(Runx2)、Osterix、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)以及胶原(Collagen)的表达.碱性磷酸酶(ALP)活性测定、茜素红染色以及Von Kossa染色检测成骨细胞的矿化水平.应用siRNA转染,沉默P.e-LPS的受体Toll-like receptor-4(TLR-4)在成骨细胞中的表达.采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析.结果:P.e-LPS(10μg/mL)作用于MC3T3-E1细胞3 d,与对照组相比,成骨分化基因DLX5、Runx2、Osterix、OCN、BSP、胶原的mR-NA表达水平显著下降(P<0.05).P.e-LPS(10μg/mL)分别作用于MC3T3-E1细胞7 d和14 d,ALP活性及茜素红染色强度下降.P.e-LPS分别作用于siRNA-TLR-4转染组及对照组7、14、21 d,与对照组相比,si-TLR-4组细胞的成骨分化基因表达水平、ALP活性、茜素红染色强度以及Von Kossa染色强度均显著高于对照组(P<0.05).结论:P.e-LPS通过受体TLR-4抑制成骨细胞的分化,从而参与根尖周病变的骨吸收过程.
牙髓卟啉单胞菌;脂多糖;Toll样受体4;成骨分化
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R781.3(口腔科学)
辽宁省自然科学基金2019-MS-375
2021-09-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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350-354
