重组hFOXA2和hPDX1慢病毒载体诱导乳牙牙髓干细胞重编程为胰岛素生成样细胞
目的:构建重组转录因子hFOXA2和hPDX1慢病毒载体,转染乳牙牙髓干细胞,诱导其向胰岛素生成样细胞(insulin-producing cells,IPCs)分化.方法:酶消化法分离培养人牙髓干细胞(DPSCs),有限稀释法纯化培养,流式细胞术分析细胞表面标志,并进行体外多向分化诱导验证;构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,Lipofectamine2000转染293T细胞进行病毒包装,通过荧光细胞计数测定病毒感染效率和滴度;以最佳感染复数(MOI)感染牙髓干细胞,诱导其体外重编程为胰岛素生成样细胞,免疫荧光染色测定PDX1 、FOXA2及胰岛素原表达,ELISA法检测胰岛素分泌情况.采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:体外成功分离培养人DPSCs;细胞表面表达STRO-1 (98.01％)、CDl46(98.51％)、CD34(99.54％)和CD45 (24.08％).体外成骨、成软骨、成脂肪诱导分化特异性染色阳性;成功构建重组Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1慢病毒载体,双酶切和测序鉴定与GenBank的序列完全符合;病毒包装效率分别为(96.15±0.17)％和(95.49±0.21)％,感染滴度约为1.80×108 GTU/mL,最佳MOI为20;诱导后的细胞表达胰岛素原、FOXA2和PDX1,胰岛素分泌量为1.92 μmol/L,较未诱导组和对照组均显著增高(P＜0.01).结论:DPSCs经重组转录因子慢病毒载体Lenti-hFOXA2、Lenti-hPDX1转染诱导,可启动细胞重编程机制,形成胰岛素生成样细胞,可作为糖尿病基因治疗的种子细胞.
乳牙牙髓干细胞、表面标志、诱导分化、细胞编程、胰岛素分泌
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R781.3(口腔科学)
陕西省科技攻关计划项目2009K17-06;陕西省科技统筹创新工程计划资源主导型产业关键技术链项目2011KTCL03-24
2014-02-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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