点突变型HIF-1α诱导犬骨髓基质干细胞骨向分化的研究

摘要：

目的:检测点突变型HIF-1α对犬骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells.BMSCs)骨向分化的作用.方法:采用LR重组系统构建慢病毒载体Lenti-WT(wild HIF-lα)、Lenti-MT(mutant HIF-1α)及对照组LentiLacZ.分别用Lenti-LacZ、Lenti-WT及Lenti-MT转染犬BMSCs,以LacZ组为对照,成功转染后,分别在0、1、4、7、14及21d提取总RNA和蛋白质,通过RT-PCR和Western印迹检测目的基因在体外常氧条件下对BMSCs成骨因子表达的调控.将带有目的基因的BMSCs按2×105/孔接种至6孔板,分别于14d和21d,运用茜素红染色(alizarin red-S staining,ARS)检测其钙结节的表达采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析.结果:当MOI=9时,BMSCs的转染效率达90％以上.目的基因转染后第4天,BMSCs的成骨因子在mRNA和蛋白水平表达显著提高,14～21 d时达到高峰,并维持在高表达状态(P＜0.05).ARS结果表明,目的基因在常氧条件下可诱导BMSCs向成骨方向分化.结论:体外常氧条件下,突变型HIF-1α能够稳定表达且保持高度活性,Lenti-MT可显著提高犬BMSCs的成骨活性.

关键词：HIF-1α、BMSCs、基因转染、骨生成

所属期刊栏目：21

分类号：R780.2(口腔科学)

资助基金：国家自然科学基金81100788;教育部科技研究重点项目212080;安徽医科大学博士科研启动基金XJ201109;安徽医科大学"青年拔尖人才支持计划"项目

在线出版日期：2013-01-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：481-487