牙龈卟啉单胞菌肽酰精氨酸脱亚氨酶的克隆与表达
目的:构建牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白肽酰精氨酸脱亚氨酶(PAD)克隆表达重组子,转化于大肠杆菌BL21中,并在最适宜条件下诱导表达.方法:以牙龈卟啉单胞菌ATCC33277全基因组DNA为模板,利用PCR技术获得目的基因PAD,将扩增得到的PAD基因定向插人线性克隆载体PMD18-T Vector中,得到克隆重组子PMD 18-T-PAD.经PCR和双酶切鉴定正确的克隆重组子PMD18-T-PAD与表达载体PET-28a经 Xhol和Ncol双酶切后,在一定连接体系下,连接构建表达质粒PET-28a-PAD.鉴定正确的原核重组表达质粒PET-28a-PAD,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,在不同浓度异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)及时间诱导下表达融合蛋白.以抗His Tag单克隆抗体为一抗,Western免疫印迹鉴定.结果:DNA测序结果表明,PAD与NCBI核酸数据库中收录的PAD序列同源性达100%;37℃,IPTG浓度为0.5mmol/L,250r/min振摇培养6h的诱导条件下,PAD可高效表达.结论:本实验成功构建了PAD的克隆表达重组子,并在大肠杆菌中表达了PAD蛋白,为进一步研究PAD的免疫学性能及相应的抗体制备奠定了基础.
牙龈卟啉单胞菌、肽酰精氨酸脱亚氨酶、原核表达
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R781.4(口腔科学)
国家自然科学基金30500560;陕西省自然科学基础研究计划项目20060242
2012-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
454-458
