Cyclin D1反义寡核苷酸对Tca8113/CDDP细胞基因转录表达的影响

摘要：

目的:构建细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的反义寡核苷酸真核表达载体,并检测其转染Tca8113/CDDP细胞系后的表达情况.方法:以Tca8113/CDDP细胞总RNA为模板,应用RT-PCR法扩增cyclin D1全长,通过克隆至pUCm-T载体中,测序完全正确;经IPTG诱导,可正确表达蛋白.上下游分别利用Hind Ⅲ和EcoRI的酶切位点插入真核表达载体pcDNA3.1,测序鉴定;并构建表达cyclin D1反义寡核苷酸的2个重组载体,通过Lipofectamine将其导入Tca8113/CDDP细胞系中,G418筛选获得阳性稳定表达细胞系;通过RT-PCR、免疫组化检测cyclin D1基因转录和蛋白表达.结果:成功构建pcDNA3.1-cyclin D1真核表达载体,分别命名为pcDNA 3.1空载体(Co)、cyclin D1mRNA 5'端为靶区的反义载体(C5')cyclin D1 mRNA 3'端为靶区的反义载体(C3')、cyclin D1正义载体(CD1).3'端反义寡核苷酸转染细胞后,cyclin D1 mRNA表达水平降低58.8%,mRNA 5'端反义寡核苷酸组无明显抑制.免疫组化结果显示,转导正义寡核苷酸组cyclin D1阳性表达为最高,转导mRNA3'端、mRNA5'端反义寡核苷酸组为弱阳性表达.结论:cyclin D1 mRNA3'端反义寡核苷酸能明显抑制cyclin D1在Tca8113/CDDP中的表达,为进一步研究逆转Tca8113/CDDP耐药性提供了实验工具.

关键词：反义寡核苷酸、真核表达载体、细胞周期蛋白D1、细胞系

所属期刊栏目：14

分类号：R739.8(肿瘤学)

在线出版日期：2005-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：169-172