小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞类器官三维培养体系的建立
本研究旨在建立小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(type 2 alveolar epithelial cells,AT2)类器官三维(three-dimensional,3D)培养体系的方法.采用酶消化与磁珠分选分离和纯化ICR小鼠肺AT2细胞,proSPC免疫荧光染色鉴定AT2细胞纯度;2维(two-dimen-sional,2D)培养8 d,5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2'-deoxyuridine,EdU)掺入和荧光染色法观察AT2细胞的增殖与分化;将AT2细胞与小鼠肺成纤维细胞(mouse lung fibroblasts,Mlg)3D共培养,光学显微镜下观察类器官生长情况,收集生长13 d的类器官,2％多聚甲醛固定后行HE染色,荧光染色观察类器官内部形态结构.结果显示,提取AT2细胞纯度超过95％;在体外培养1～8 d期间,AT2细胞EdU荧光染色阴性,未见增殖;AT2细胞形状逐渐趋向扁平鳞状、细胞表面积显著增大;在体外培养3 d后,有部分AT2细胞特异性标志物proSPC阳性细胞开始出现Ⅰ型肺泡上皮细胞(type 1 alveolar epithelial cells,AT1)标志物T1α和HopX表达,培养5 d和8 d后T1α和HopX表达量进一步增加,proSPC的表达量和proSPC阳性细胞比例逐渐减小.AT2细胞与Mlg 3D共培养4 d时形成圆球样细胞团块,生长至13 d时形成肺泡类器官.组织学分析显示:肺泡类器官呈一空心小体;表达proSPC的AT2细胞主要分布于类器官的外侧;表达HopX、由AT2细胞转分化形成的AT1细胞则主要位于类器官小体的内部.proSPC/EdU双荧光染色显示:位于肺泡类器官外侧圈层的proSPC阳性AT2细胞中,有部分细胞表现为proSPC/EdU双阳性,表明类器官内的AT2细胞是具有增殖能力的细胞.以上结果显示,本研究成功建立了小鼠AT2类器官3D培养体系.
Ⅱ型肺泡上皮细胞、Ⅰ型肺泡上皮细胞、小鼠肺成纤维细胞、分化、增殖、类器官
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R394.2;R713.6;Q578
2022-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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