应用杆状病毒表达系统有效表达PEDV纤突蛋白

摘要：

为了解决猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)变异毒株纤突蛋白(S蛋白)分子质量大、难以表达的问题,研究采用Signal 4.0软件预测S蛋白信号肽,构建表达替换信号肽S蛋白的重组质粒,鉴定正确后重组质粒转化DH10Bac感受态细胞并进行蓝白斑筛选,挑取白斑进行菌落PCR检测,检测无误后提取Bacmid DNA转染Sf9细胞,制备重组杆状病毒.采用杆状病毒表达系统表达目的蛋白,采用免疫印迹法(West?ern blot)和串联式飞行时间质谱(MALDI-TOF-TOF)技术鉴定表达蛋白,采用SDS-PAGE半定量方法测定蛋白含量;以Balb/c小鼠为材料进行免疫试验,应用中和试验、ELISPOT试验测定小鼠抗体滴度及细胞因子水平.结果表明,S蛋白氨基端20个氨基酸为蛋白信号肽,重组质粒经双酶切鉴定构建成功,经菌体PCR检测验证表达骨架构建完成,转染Sf9细胞后获得重组病毒rB-PEDV-S;重组病毒表达蛋白经Western-blot和MALDI-TOF-TOF鉴定为目的蛋白,蛋白质量浓度可达0.0086μg/μL;替换原有信号肽可有效提高S蛋白产量,以0.86μg/只剂量免疫小鼠后,可刺激小鼠产生IL-4,但血清抗体水平与PBS组无明显差异.替换信号肽有助于S蛋白表达,利用表达蛋白免疫小鼠可有效刺激IL-4产生.

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV)、杆状病毒、免疫印迹法、串联式飞行时间质谱、蛋白表达、疫苗

所属期刊栏目：50

分类号：S858.28(动物医学（兽医学）)

资助基金：十三五重点研发计划项目2016YFD0500101

在线出版日期：2022-05-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：714-719