miR-26对TGF-β2诱导的人Tenon氏囊成纤维细胞迁移、细胞外基质蛋白表达的调控作用及其机制

摘要：

目的 观察miR-26对转化生长因子β2(TGF-β2)诱导后人Tenon氏囊成纤维细胞(HTFs)的细胞迁移及细胞外基质(ECM)蛋白表达的调控作用,并探讨其可能的作用机制.方法 切取青光眼手术患者的结膜囊组织,以组织贴壁法体外培养HTFs.取传至第3～5代的HTFs,随机分为空白组(不予转染)、TGF-β2组(不予转染)、TGF-β2+miR-26 mimics组(转染miR-26类似物)、TGF-β2+mimics NC组(转染miR-26类似物阴性对照物),TGF-β2+miR-26 in-hibitors组(转染miR-26抑制物),TGF-β2+inhibitors NC组(转染miR-26抑制物阴性对照物),转染24 h后除空白组外均加入TGF-β25μg/L刺激48 h.采用划痕实验检测细胞迁移率,Western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、CTGF(荧光素酶报告基因实验证实miR-26和CTGF存在靶向关系)蛋白,实时荧光定量PCR法检测CTGF mRNA.将对数生长期的HTFs分为空白转染组(不予转染)、TGF-β2+miR-26 inhibitors组(转染miR-26 inhibitors)、TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-NC组(转染miR-26 inhibitors+阴性对照siRNA)、TGF-β2+miR-26 in-hibitors+si-CTGF组(转染miR-26 inhibitors+CTGF-siRNA),转染处理24 h后均加入TGF-β25μg/L刺激48 h,比较四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达.结果 六组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达:空白组、TGF-β2+miR-26 mimics组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+inhibitors NC组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05).六组CTGF mRNA相对表达量:空白组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+miR-26 mimics组、TGF-β2+inhibitors NC组、TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05).六组CTGF蛋白相对表达量:空白组、TGF-β2+miR-26 mimics组<TGF-β2组、TGF-β2+mimics NC组、TGF-β2+inhibitors NC组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组(P均<0.05).四组细胞迁移率及COLⅠ、Fibronectin蛋白表达:TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-CTGF组<空白转染组<TGF-β2+miR-26 inhibitors组、TGF-β2+miR-26 inhibitors+si-NC组(P均<0.05).结论 miR-26可以抑制TGF-β2诱导后HFTs的细胞迁移及ECM蛋白合成,该作用可能是通过转录后水平靶向CTGF来实现的.

关键词：miR-26、人Tenon氏囊成纤维细胞、细胞迁移、细胞外基质、CTGF基因、转化生长因子β2、青光眼

所属期刊栏目：62

分类号：R775(眼科学)

资助基金：山东省自然科学基金资助项目;山东省泰安市科技发展计划项目

在线出版日期：2023-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：34-39