舒尼替尼耐药肾癌细胞中circTMBIM6表达变化及其与miR-19a-3p/PPARα轴的调控关系

摘要：

目的 观察舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达变化,并探讨其与miR-19a-3p/PPARα轴的关系.方法 取舒尼替尼耐药的肾癌细胞A498、Caci-1、780-O,采用qRT-PCR法检测细胞中TMBIM6表达.采用Star?base、Targetscan数据库,分别预测miR-19a-3p与circTMBIM6 mRNA的3'非翻译区(3'UTR)和PPARαmRNA的3'UTR是否存在互补结合.构建包含结合位点的野生型和突变型circTMBIM6 mRNA 3'UTR双荧光报告质粒.将circTMBIM6-WT、circTMBIM6-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞.同时将PPARα-WT,PPARα-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞,构建野生型和突变型的PPARαmRNA 3'UTR双荧光报告质粒,检测miR-19a-3p对circTMBIM63'UTR和PPARαmRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性的影响.si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC阴性对照共转染至A498、Caci-1、780-O细胞,将3种肾癌细胞分为抑表达组、对照组,分别转染si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC,采用qPCR法检测三种细胞中miR-19a-3p表达.将三种细胞分为miR-19a-3p过表达组、miR-19a-3p抑表达组和对照组,分别转染miR-19a-3p mimics、miR-19a-3p inhibitor及si-NC+miR-NC阴性对照,采用qRT-PCR法和Western blotting法检测PPARαmRNA和蛋白表达.将三种肾癌细胞分成阴性对照组、miR-19a-3p抑制组、circTMBIM6抑制组,分别转染si-NC+miR-NC阴性对照、si-NC+miR-19a-3p inhibitor和si-circTMBIM,采用RT-PCR法和Western blotting法分别检测PPARαmRNA和蛋白表达,进一步验证circTMBIM6通过miR-19a-3p调控PPARα的表达.采用CCK-8实验检测各组细胞增殖抑制率,观察肾癌细胞舒尼替尼耐药中circTMBIM6与miR-19a-3p/PPARα轴的调控作用.结果 与正常肾癌细胞相比,舒尼替尼耐药的肾癌细胞circTMBIM6表达均升高(P均<0.01).生物信息学分析预测显示,miR-19a-3p分别与circTMBIM6的3'UTR以及PPARαmRNA的3'UTR具有潜在互补结合位点.双荧光素酶报告基因活性检测显示,在circTMBIM6野生型3'UTR中,miR-19a-3p mimics组荧光素酶活性低于miR-NC组(P<0.05),但在circTMBIM6突变型3'UTR中,两组荧光素酶活性无明显变化.在三种肾癌细胞A498、Caci-1、780-O中,si-circTMBIM6组miR-19a-3p表达均高于si-NC+miR-NC组(P均<0.05).三种细胞中,miR-19a-3p抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组升高;circTM?BIM6抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组降低(P均<0.05).CCK-8实验显示,circTMBIM6抑制组细胞增殖抑制率低于阴性对照组,miR-19a-3p抑制组细胞增殖抑制率高于阴性对照组(P均<0.05).结论 舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达升高;circTMBIM6通过海绵吸收miR-19a-3p调控PPARα表达,降低RCC对舒尼替尼的敏感性,导致耐药的发生.

关键词：肾肿瘤、舒尼替尼耐药、circTMBIM6、miR-19a-3p、PPARα

所属期刊栏目：62

分类号：R737.11(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金81760452

在线出版日期：2022-10-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6-11