检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立

摘要：

目的 建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法.方法 采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA.采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体.以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线.运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R2确定线性范围,计算最低检测限.以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性.结果 抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面.随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL～1000 ng/mL,R2为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL.重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的.结论 本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点.

关键词：B细胞成熟抗原、噬菌体展示、实时荧光定量免疫PCR、噬菌体M13KO7、单链抗体、多发性骨髓瘤

所属期刊栏目：62

分类号：R392

资助基金：北京中医药大学高层次人才科研启动经费项目9011451310032

在线出版日期：2022-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：43-47