miR-370-3p和FOXM1 mRNA对人成骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响观察及其靶向关系验证

摘要：

目的 观察骨肉瘤组织中miR-370-3p、FOXM1 mRNA的表达,观察miR-370-3p和FOXM1 mRNA对人成骨肉瘤细胞系MG63增殖、迁移及侵袭的影响,并验证其靶向关系机制.方法 ①观察骨肉瘤及癌旁组织miR-370-3p及及其下游靶基因叉头框蛋白M1(FOXM1)mRNA表达:37例骨肉瘤患者,均行肿瘤切除术,术中保存骨肉瘤及癌旁组织,采用实时定量PCR法检测骨肉瘤及癌旁组织miR-370-3p、FOXM1 mRNA,分析骨肉瘤组织FOXM1 mRNA表达与miR-370-3p表达的相关性.采用Kaplan-Meier曲线、Log-Rank检验分析miR-370-3p表达与骨肉瘤患者临床病理参数及预后关系.②观察miR-370-3p过表达及FOXM1抑制表达的人成骨肉瘤细胞系MG63增殖、迁移及侵袭的影响:取MG63细胞分为1～4组,分别转染miR-370-3p mimic(促进miR-370-3p表达)、mimic NC(空载体质粒)、空白对照组及FOXM1 siRNA干扰质粒(FOXM1基因敲除质粒).分别于转染0、24、48、72、96 h采用CCK-8法观察各组细胞增殖情况,采用划痕实验观察各组细胞迁移情况,采用Transwell小室观察各组细胞侵袭能力.③预测MG63细miR-370-3p与FOXM1靶向关系构建pmirGLO-FOXM1-野生型/突变型质粒,将MG63细胞分为A、B、C、D组,分别用1μL pmirGLO-FOXM1-WT+200 nmol miR-370-3p mimic、1μL pmirGLO-FOXM1-WT+mimic NC、1μL pmirGLO-FOXM1-MUT+200 nmol miR-370-3p mimic、1μL pmirGLO-FOXM1-MUT+200 nmol mimic NC转染.转染24 h时采用双荧光素酶报告检测系统观察各组细胞荧光活性.结果 ①与癌旁组织比较,骨肉瘤组织miR-370-3p相对表达量低、FOXM1 mRNA相对表达量高(t=4.66,3.41;P均<0.05).随miR-370-3p表达量升高,骨肉瘤组织FOXM1 mRNA表达量呈下降趋势(R2=0.6481,P=0.1284).miR-370-3p表达与骨肉瘤患者临床分期、远端转移情况有关(χ2=4.430、6.027;P均<0.05).miR-370-3p低表达的骨肉瘤患者预后比miR-370-3p高表达患者差(P<0.05).②2、3组相比,转染48、72、96 h时1、4组细胞OD450值均降低(P均<0.05).与2、3组相比,转染24 h时1、4组划痕愈合率低、穿膜细胞数少(P均<0.05).③与B组比较,A组细胞荧光活性降低(P<0.05);与D组比较,C组细胞中荧光活性变化不明显(P>0.05).结论 骨肉瘤组织中miR-370-3p表达降低、FOXM1 mRNA表达升高.促进miR-370-3p表达及FOXM1抑制表达的MG63细胞增殖、侵袭及迁移能力均降低.骨肉瘤细胞中miR-370-3p可能通过靶向调控FOXM1表达来抑制MG63的增殖、迁移及侵袭.

关键词：微小RNA、微小RNA-370-3p、叉头框蛋白M1、骨肉瘤、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭

所属期刊栏目：62

分类号：R739.96(肿瘤学)

资助基金：山东省自然科学基金面上项目ZR2020MH200

在线出版日期：2022-07-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：36-40