沉默lncRNA LINC00472对脂多糖诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制

摘要：

目的 探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472对脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2(以下称HK-2细胞),随机分为对照组、LPS组、LPS+si-LINC00472组、LPS+si-NC组、LPS+miR-136-3p组、LPS+miR-NC组、LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组和LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组.LPS+si-LINC00472组转染si-LINC00472,LPS+si-NC组转染si-NC,LPS+miR-136-3p组转染miR-136-3p,LPS+miR-NC组转染miR-NC,LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组转染si-LINC00472、anti-miR-136-3p,LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组转染si-LINC00472、anti-miR-NC,转染6 h后给予1μg/mL LPS刺激24 h.LPS组不予转染,仅给予1μg/mL LPS刺激24 h.对照组常规培养,不予转染和LPS刺激.收集各组干预后细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00472、miR-136-3p表达,采用MTT法检测再培养48 h细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测培养上清液IL-6、IL-8,采用Western blotting法检测程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达.通过LncBase Predicted v.2在线预测网站、starBase数据库预测lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的靶向调控关系.结果 LPS组lncRNA LINC00472相对表达量明显高于对照组,miR-136-3p相对表达量明显低于对照组,细胞增殖活性亦明显低于对照组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显高于对照组(P均<0.05).LPS+si-LINC00472组lncRNA LINC00472相对表达量明显低于LPS+si-NC组,miR-136-3p相对表达量明显高于LPS+si-NC组,细胞增殖活性亦明显高于LPS+si-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显低于对照组(P均<0.05).LPS+miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显高于LPS+miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显低于LPS+miR-NC组(P均<0.05).LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(P均<0.05).经LncBase Predicted v.2在线预测网站和starBase数据库预测并经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA LINC00472与miR-136-3p存在靶向结合位点,miR-136-3p与PDCD4存在靶向结合位点.结论 沉默lncRNA LINC00472可通过促进miR-136-3p表达、抑制PDCD4表达,减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤.

关键词：急性肾损伤、肾小管上皮细胞、长链非编码RNA LINC00472、微小RNA-136-3p、基因沉默、程序性细胞死亡因子4

所属期刊栏目：62

分类号：R692(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)

资助基金：浦东新区国家中医药发展综合改革试验区建设项目PDZY-2020-0404

在线出版日期：2022-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：56-61