过/降表达miR-20a-5p的骨肉瘤细胞增殖、侵袭能力及Bax、Bcl-2、E2F5蛋白表达观察

摘要：

目的 观察miR-20a-5p在骨肉瘤(OS)细胞中的表达变化,探讨miR-20a-5p表达对OS细胞增殖、凋亡及侵袭的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量PCR法检测正常人成骨细胞系hFOB1.19及OS细胞系(U-20S、143B、Saos-2)中的miR-20a-5p表达量.将OS细胞系143B随机分为miR-20a-5p过表达组、miR-20a-5p抑制表达组及阴性对照组,通过LipofectamineTM3000分别转染miR-20a-5p mimics、miR-20a-5p inhibit及scramble,转染24 h.采用CCK-8法检测三组培养0、24、48、72 h的的光密度值(OD值),流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell小室实验检测侵袭细胞数.在线数据库TargetScan预测结果显示E2F转录因子5(E2F5)存在与miR-20a-5p结合的潜在靶点,荧光素酶报告基因实验证实miR-20a-5p的靶基因为E2F5,采用Westen blotting法检测细胞Bax、Bcl-2、E2F5蛋白表达.结果 OS细胞系U-20S、143B、Saos-2中miR-20a-5p相对表达量分别为1.94±0.35、1.05±0.13、0.35±0.06,均明显低于正常人成骨细胞系hFOB1.19中的3.89±0.53(P均<0.05).随着培养时间的延长,三组OD值均呈升高趋势;培养24、48、72 h,相同培养时间下miR-20a-5p过表达组、阴性对照组、miR-20a-5p抑制表达组OD值依次升高,组间两两比较P均<0.05.miR-20a-5p过表达组、阴性对照组、miR-20a-5p抑制表达组细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量均依次降低,侵袭细胞数、Bcl-2、E2F5蛋白相对表达量均依次升高,组间两两比较P均<0.05.结论 miR-20a-5p在OS细胞系中表达下调,过表达miR-20a-5p可抑制OS细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡,其机制可能与下调E2F5、Bcl-2及上调Bax蛋白表达有关,降表达miR-20a-5p则具有相反的作用.

关键词：骨肉瘤、miR-20a-5p、细胞增殖、细胞凋亡、细胞侵袭、E2F5

所属期刊栏目：62

分类号：R738.1(肿瘤学)

在线出版日期：2022-05-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：42-46