miR-20b-5p靶向调控Cyclin D1对NSCLC细胞生物学行为的影响

摘要：

目的 探讨微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)靶向调控细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响及其作用机制.方法 体外培养NSCLC细胞系A549、H1975、PC-9和人正常肺上皮细胞BEAS-2B,采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p相对表达量,选择miR-20b-5p相对表达量最低的NSCLC细胞进行后续实验.借助Starbase数据库,预测miR-20b-5p与Cyclin D1的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b-5p与Cyclin D1的靶向调控关系.体外培养NSCLC细胞,分别转染miR-NC与miR-20b-5p mimic(分别设为miR-NC组、miR-20b-5p mimic组)、si-NC与si-Cyclin D1(分别设为si-NC组、si-Cyclin D1组),采用RT-qPCR法检测miR-20b-5p或Cyclin D1相对表达量.收集上述转染细胞,采用MTT法检测细胞存活率,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blotting法检测Cyclin D1、CDK4、FOXM1蛋白表达.结果 H1975、PC-9、A549细胞miR-20b-5p相对表达量均低于BEAS-2B细胞,并且A549细胞miR-20b-5p相对表达量低于H1975、PC-9细胞(P均<0.05).因此,选择A549细胞进行后续实验.经Starbase数据库预测,miR-20b-5p与Cyclin D1存在靶向结合位点;经双荧光素酶报告基因实验验证,miR-20b-5p与Cyclin D1存在靶向调控关系.miR-20b-5p mimic组miR-20b-5p相对表达量高于miR-NC组,si-Cyclin D1组Cyclin D1相对表达量低于si-NC组(P均<0.05).与miR-NC组/si-NC组比较,miR-20b-5p mimic组/si-Cyclin D1组细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,穿膜细胞数减少,G1期细胞比例增加、G2/M期细胞比例降低(P均<0.05).与miR-NC组/si-NC组比较,miR-20b-5p mimic组/si-Cyclin D1组Cyclin D1、CDK4、p-FOXM1蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05),而FOXM1蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 miR-20b-5p通过靶向调控Cyclin D1促进NSCLC细胞增殖和侵袭,抑制其凋亡并将细胞阻滞于G1期,其作用机制可能与调控Cyclin D1/CDK4/FOXM1信号通路有关.

关键词：非小细胞肺癌;微小RNA-20b-5p;细胞周期蛋白D1

所属期刊栏目：61

分类号：R734.2(肿瘤学)

在线出版日期：2021-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：36-40,45