miR-582-5p靶向PDCD10对胃癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响

摘要：

目的 探讨微小RNA(miR)-582-5p靶向程序性细胞死亡因子10(PDCD10)对胃癌细胞迁移、侵袭、凋亡的影响.方法 常规培养人正常胃黏膜上皮细胞株(GES-1)、胃癌细胞系(HGC-27、MKN74、NUGC-4),用qPCR法检测细胞中miR-582-5p表达,筛选miR-582-5p表达最低的HGC-27作为实验细胞.将对数生长期的HGC-27随机分为8组,各组采用脂质体转染法分别转染miR-582-5p模拟物(使miR-582-5p过表达)、miR-582-5p抑制剂(使miR-582-5p低表达)、miR-582-5p模拟物阴性对照miR-NC、miR-582-5p抑制剂阴性对照anti-miR-NC、PDCD10小干扰RNA si-PDCD10(使PDCD10低表达)、PDCD10小干扰RNA阴性对照si-NC、PDCD10过表达载体pcDNA-PD-CD10(使PDCD10过表达)、过表达载体阴性对照pcDNA-NC.用qPCR法检测细胞内miR-582-5p、PDCD10 mRNA表达,证实转染成功.用Western blotting法检测细胞内PDCD10、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达,用流式细胞术测算细胞凋亡率,用Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭能力,用双荧光素酶报告基因检测法验证miR-582-5p与PDCD10的靶向调控关系.结果 与miR-NC组比较,miR-582-5p组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量高,MMP2、MMP9蛋白相对表达量低,细胞凋亡率高,细胞迁移数、侵袭数少(P均<0.05).与si-NC组比较,Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量低,MMP2、MMP9蛋白相对表达量高,细胞凋亡率低,细胞迁移数、侵袭数多(P均<0.05).miR-582-5p与PDCD10的3'UTR存在靶向结合位点.miR-582-5p与WT-PDCD10报告质粒共转染HGC-27后的荧光素酶活性低于miR-NC与WT-PDCD10报告质粒共转染(P<0.05);miR-582-5p或miR-NC与MUT-PDCD10报告质粒共转染HGC-27后的荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05).与miR-NC组比较,miR-582-5p组PDCD10蛋白相对表达量低(P<0.05);与anti-miR-NC组比较,anti-miR-582-5p组PDCD10蛋白相对表达量高(P<0.05).与miR-582-5p+pcDNA-NC组比较,miR-582-5p+pcDNA-PDCD10组Cleaved-caspase-3蛋白相对表达量低,MMP2、MMP9蛋白相对表达量高,细胞凋亡率低,细胞迁移数、侵袭数多(P均<0.05).结论 miR-582-5p可通过靶向抑制PDCD10表达诱导胃癌细胞凋亡,抑制细胞迁移、侵袭.

关键词：胃癌、微小RNA-582-5p、程序性细胞死亡因子10、细胞迁移、细胞侵袭、细胞凋亡

所属期刊栏目：60

分类号：R735.2(肿瘤学)

在线出版日期：2020-11-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：37-40,44