心肌组织稳定过表达Hotair的新生小鼠模型建立及验证

摘要：

目的 建立一种心肌组织稳定过表达Hotair的新生小鼠模型并进行验证.方法 采用改良后的重叠延伸PCR法从小鼠基因组中获取目的基因Hotair,构建过表达Hotair的慢病毒质粒,并采用高分子聚合物转染法进行包装及浓缩纯化,测序结果显示构建的慢病毒质粒Hotair序列正确.将18只P0期(出生24 h内)小鼠随机分为Hotair过表达组、阴性对照组、空白对照组,每组6只.Hotair过表达组于左侧胸腔第五肋间隙注射浓缩后的Hotair慢病毒10μL,阴性对照组和空白对照组分别注射等量空载病毒和生理盐水;各组注射4 d后处死小鼠,取心脏组织.采用实时定量荧光PCR法检测Hotair及受Hotair协同调控的赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)mRNA表达,Western blotting法检测LSD1调控的下游蛋白即组蛋白H3二甲基化的赖氨酸4(H3K4me2)表达.结果 Hotair过表达组心肌组织Hotair表达高于阴性对照组和空白对照组,H3K4me2蛋白表达低于阴性对照组和空白对照组(P均<0.01).Hotair过表达组与阴性对照组心肌组织LSD1 mRNA相对比表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 成功应用慢病毒载体建立心肌组织稳定过表达Hotair的新生小鼠模型;该模型构建方法简便快捷、Hotair过表达效果明显,为后续研究Hotair参与心脏疾病的相关机制提供了可靠的动物模型.

关键词：Hotair、质粒转染、去甲基化、慢病毒载体、心肌组织、小鼠

所属期刊栏目：60

分类号：Q331(人工选择与自然选择)

资助基金：天津市自然科学基金青年项目16JCQNJC12100

在线出版日期：2020-09-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：25-29