Homer1基因真核表达重组质粒构建及HT22细胞转染鉴定

摘要：

目的 构建Homer1基因真核表达重组质粒并在HT22细胞中转染和鉴定.方法 提取APP/PS1双转基因小鼠海马组织总RNA,经逆转录、PCR扩增,获取Homer1基因编码序列,1％琼脂糖凝胶电泳分离后,将Ho-mer1基因序列插入p3×FLAG-CMV-10载体的多克隆位点区域,获得p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,双酶切后鉴定重组质粒并进行基因测序.取HT22细胞,随机分为p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组,p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组、p3×FLAG-CMV-10空载体组分别转染p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒、p3×FLAG-CMV-10空载体,空白对照组不予转染.采用Western blotting法检测各组转染后Homer1蛋白表达.结果 成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Homer1基因真核表达重组质粒,经双酶切鉴定和基因测序,该重组质粒序列与目的基因序列一致.p3×FLAG-CMV-10-Homer1重组质粒组Homer1蛋白相对表达量明显高于p3×FLAG-CMV-10空载体组、空白对照组(P均<0.05),而p3×FLAG-CMV-10空载体组与空白对照组Homer1蛋白相对表达量比较P>0.05.结论 本研究成功构建了p3×FLAG-CMV-10-Ho-mer1基因真核表达重组质粒,并成功转染HT22细胞,这为研究Homer1蛋白对脑内Aβ清除的影响及在阿尔茨海默病发病机制中的作用奠定了基础.

关键词：阿尔茨海默病、Homer1基因、真核表达重组质粒、瞬时转染

所属期刊栏目：60

分类号：R741;Q785(神经病学与精神病学)

资助基金：北京市医院管理局"登峰"人才培养计划;首都医科大学科研培育基金

在线出版日期：2020-09-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：44-47