miR-16-5p、IRAK2基因对关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响及其机制

摘要：

目的 观察miR-16-5p、IRAK2基因对脂多糖(LPS)诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 剪取胎鼠膝关节获取软骨细胞,常规传代培养.通过靶基因预测网站starBase预测miR-16-5p靶基因,采用荧光素酶报告基因实验进行验证.取对数生长期软骨细胞分成8组.LPS组加入LPS诱导骨关节炎软骨细胞模型,NC组加入等量培养基;LPS+miR-16-5p组转染miR-16-5p模拟物(miR-16-5p mimics)后加入LPS,LPS+miR-con组转染对照模拟物(miR-con)后加入LPS;LPS+si-IRAK2组转染IRAK2 siRNA(si-IRAK2)后加入LPS,LPS+si-con组转染对照siRNA(si-con)后加入LPS;LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组转染miR-16-5p mim-ics、IRAK2过表达质粒(pcDNA-IRAK2)后加入LPS,LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组转染miR-16-5p mimics、对照质粒(pcDNA-con)后加入LPS.采用qRT-PCR法检测NC组、LPS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mRNA;采用MTT法测算各组细胞增殖能力(以细胞存活率表示细胞增殖能力);采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况,计算细胞凋亡率;采用Western Blotting法检测各组细胞中IRAK2、细胞周期蛋白1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白.结果 LPS组细胞中miR-16-5p、IRAK2 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.10、4.01±0.41,NC组分别为5.33±0.53、0.85±0.09,两组相比,P均<0.05.LPS组、NC组细胞存活率分别为63.03％ ±6.31％、100.00％ ±10.26％,LPS+miR-16-5p组、LPS+miR-con组分别为93.16％ ±9.32％、65.46％ ±6.53％,LPS+si-IRAK2组、LPS+si-con组分别为91.46％ ±9.15％、60.45％ ±6.05％,LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为68.08％ ±6.81％、93.16％ ±9.31％,两组间相比,P均<0.05.LPS组、NC组细胞凋亡率分别为28.46％ ±2.85％、1.59％ ±0.16％,LPS+miR-16-5p组、LPS+miR-con组分别为5.09％ ±0.51％、30.01％ ±3.02％,LPS+si-IRAK2组、LPS+si-con组分别为4.88％ ±0.50％、29.10％ ±2.91％,LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组、LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为20.89％ ±2.10％、6.15％ ±0.62％,两组间相比,P均<0.05.LPS组细胞中IRAK2、CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.20±0.12、0.40±0.04、0.90±0.09、0.25±0.03,NC组分别为0.35±0.05、1.00±0.10、0.10±0.02、0.85±0.09,两组相比,P均<0.05;LPS+miR-16-5p组分别为0.90±0.09、0.28±0.03、0.75±0.08、0.10±0.02,LPS+miR-con组分别为0.42±0.05、0.92±0.09、0.30±0.05、0.88±0.08,两组相比,P均<0.05;LPS+si-IRAK2组分别为0.55±0.06、0.92±0.09、0.30±0.03、0.80±0.08,LPS+si-con组分别为1.20±0.12、0.42±0.05、0.90±0.09、0.32±0.05,两组相比,P均<0.05;LPS+miR-16-5p+pcDNA-IRAK2组分别为1.10±0.10、0.55±0.05、0.80±0.08、0.42±0.05,LPS+miR-16-5p+pcDNA-con组分别为0.52±0.05、0.92±0.09、0.32±0.05、0.84±0.05,两组相比,P均<0.05.结论 LPS诱导的胎鼠骨关节炎软骨细胞中miR-16-5p低表达、IRAK2高表达,上调miR-16-5p表达、下调IRAK2基因表达均可促进软骨细胞增殖、抑制细胞凋亡,其作用机制可能与CyclinD1、Bax、Bcl-2蛋白表达有关.

关键词：微小RNA、微小RNA-16-5p、IRAK2基因、骨关节炎、软骨细胞、细胞增殖、细胞凋亡、细胞实验

所属期刊栏目：59

分类号：R684.3(骨科学（运动系疾病、矫形外科学）)

在线出版日期：2020-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：37-41